동물의 염색체 특이 반복 염기서열을 이용한 fluorescence in situ hybridization(FISH). 류란숙1,2, 이상찬2, 김종흥2, 류은경1, 전혜정1, 이철영1, 손시환1​

J. Anim. Sci. & Technol. (Kor.) Proceeding 2:72, 2001

동물의 염색체 특이 반복 염기서열을 이용한

fluorescence in situ hybridization(FISH)

류란숙1,2, 이상찬2, 김종흥2, 류은경1, 전혜정1, 이철영1, 손시환1

진주산업대학교 동물자원학과1, 세화 산부인과 난임/유전 연구소2

Abstract

Fluorescence in situ hybridization(FISH)은 특정 염색체나 염색체 상의 위치 

판별을 위해 쓰이는 분자세포유전학적 방법이다. 본 연구는 소, 닭 및 사람의 

genomic DNA를 template로 하고 polymerase chain reaction(PCR) 방법으로 특정 

염색체의 반복 염기서열을 증폭하여 이를 FISH용 probe로 개발하고자 하며, 또

한 본 probe를 이용한 최적의 FISH 기법을 소개하고자 한다. 대표적 염색체 특

이 반복 염기서열로서 소 및 사람의 경우 Y 염색체상 DYZ의 일부 염기서열을, 닭

의 경우 Z 염색체상의 Xho family를 대상으로 하였다. 각 종별 대상 염기에 대

한 적합한 primers를 제작하여 PCR로서 이의 존재를 확인함과 동시에 FISH probe

의 제작을 위해 digoxigenin-dUTP를 이용한 PCR을 수행함으로써 다량의 FISH 

probe를 성공적으로 확보할 수 있었다. 한편 indirect method로 FISH를 수행할 

경우 기존 방법에 비하여 현저히 hybridization 시간을 줄일 수 있는 기술적 방

법의 개발과 이를 이용한 다양한 대상 세포 모두에서 성공적으로 Y 또는 Z 염색

체에 형광 접합 양상을 발견할 수 있었다. 본 연구에 이용한 대상 세포로서는 백

혈구 세포, 수정란, 정자, 닭의 feather pulp cell 뿐만 아니라 사람의 양수 세

포로 이들 모든 세포에서 Y 및 Z 염색체에만 특이적 형광 접합 발현 양상을 관찰

할 수 있었고, 중기상 세포뿐만 아니라 배양하지 않은 간기상의 세포에서도 이

의 명확한 구분이 가능함으로서 본 기법의 신뢰성과 신속성이 입증되었다. 따라

서 염색체 특이 반복 염기서열의 경우 probe의 제작 방법이 용이하고 또한 PCR

을 이용하여 FISH probe의 다량 확보가 가능하며 이의 접합과 발광양상이 명확함

에 따라 기존 세포유전학적 분석 기법과 함께 동물의 유전, 발생 및 분자생물학

적 연구에 유용한 기법이 될 것으로 기대된다.

key words: FISH, PCR, chromosome, repetitive DNA, DYZ-1, Zho-1